Commencez par choisir la composition de votre milieu de culture, puis mettez tout les ingrédients dans une casserole.

Mélangez le tout jusqu’à ébullition puis coupez le feu.

Versez ensuite votre préparation dans un récipient en verre (ici un erlenmeyer). J’ai ajouté un « bouchon de polyfil » dans le col afin d’éviter une éventuelle évaporation pendant la stérilisation.

Recouvrez votre récipient avec de l’aluminium avant de procéder à une stérilisation (25 à 30 minutes). J’en profite pour stériliser en même temps mes boites de Pétri (en verre).

Lorsque votre stérilisation est finie, laissez un peu refroidir votre mélange afin de pouvoir tenir votre récipient dans les mains sans vous bruler (veillez tout de même à ce que l’agar-agar ne se solidifie pas en refroidissant!)

Aspirez de l’H2O2 à l’aide d’une seringue: ajoutez entre 6mL et 12mL d’H2O2 (concentration 3% ou 10 volumes)  par litre de milieu. Dans cet exemple, j’ai préparé 200mL de milieu de culture: je dois donc ajouter entre 1,2mL et 2,4mL d’H2O2. Plus vous ajouterez d’H2O2 à votre gélose, plus elle sera résistante aux contaminations. Par contre j’ai remarqué que plus la concentration d’H2O2 est importante, plus le mycélium est ralenti pour coloniser la gélose nutritive.

Mélangez votre milieu de culture en faisant des mouvements circulaires.

Aspirez votre milieu de culture à l’aide d’une seringue stérile de 50mL ou 100mL,

puis injectez-le dans vos boites de Pétri.

Il ne vous plus qu’à laisser refroidir vos géloses avant de les utiliser.

Ces géloses, plus résistantes aux contaminations, sont très utiles pour produire votre mycélium à partir d’un clonage de tissu. Par contre, si vous désirez produire votre mycélium à partir d’une empreinte de spores, utilisez une gélose sans H2O2.

Vous pouvez acheter le matériel nécessaire à la fabrication des milieux de culture en gélose dans votre boutique.