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mar 03 2013

Comment préparer une gélose nutritive additionné d’H2O2?


Commencez par choisir la composition de votre milieu de culture, puis mettez tout les ingrédients dans une casserole.

préparation d'une gélose additionné d'H2O2Mélangez le tout jusqu’à ébullition puis coupez le feu.

Versez votre milieu dans un erlenmeyerVersez ensuite votre préparation dans un récipient en verre (ici un erlenmeyer). J’ai ajouté un « bouchon de polyfil » dans le col afin d’éviter une éventuelle évaporation pendant la stérilisation.

stériliser votre gélose nutritiveRecouvrez votre récipient avec de l’aluminium avant de procéder à une stérilisation (25 à 30 minutes). J’en profite pour stériliser en même temps mes boites de Pétri (en verre).

Lorsque votre stérilisation est finie, laissez un peu refroidir votre mélange afin de pouvoir tenir votre récipient dans les mains sans vous bruler (veillez tout de même à ce que l’agar-agar ne se solidifie pas en refroidissant!)

préparation d'une gélose nutritive + H2O2Aspirez de l’H2O2 à l’aide d’une seringue: ajoutez entre 6mL et 12mL d’H2O2 (concentration 3% ou 10 volumes)  par litre de milieu. Dans cet exemple, j’ai préparé 200mL de milieu de culture: je dois donc ajouter entre 1,2mL et 2,4mL d’H2O2. Plus vous ajouterez d’H2O2 à votre gélose, plus elle sera résistante aux contaminations. Par contre j’ai remarqué que plus la concentration d’H2O2 est importante, plus le mycélium est ralenti pour coloniser la gélose nutritive.

injecter H2O2 dans votre milieu de cultureMélangez votre milieu de culture en faisant des mouvements circulaires.

mélanger en faisant des mouvements circulairesAspirez votre milieu de culture à l’aide d’une seringue stérile de 50mL ou 100mL,

Aspirer le milieu avec une seringue stérilepuis injectez-le dans vos boites de Pétri.

injecter le milieu gélosé dans les boites de pétri avec une seringue stérileIl ne vous plus qu’à laisser refroidir vos géloses avant de les utiliser.

milieu géloséCes géloses, plus résistantes aux contaminations, sont très utiles pour produire votre mycélium à partir d’un clonage de tissu. Par contre, si vous désirez produire votre mycélium à partir d’une empreinte de spores, utilisez une gélose sans H2O2.

Vous pouvez acheter le matériel nécessaire à la fabrication des milieux de culture en gélose dans votre boutique.

Recherches qui ont permis de trouver cet article:

  • preparation dun milieu de culture LA GELOSE NUTRITIVE
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  • comment conserver une gélose
  • comment preparer une gelose neutre

4 Commentaires

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  1. Mathieu

    Bonjour,
    J’aurais voulu savoir la durée de conservation d’une gélose. Je voudrais m’en servir pour conserver mon mycélium entre chaque culture mais difficile de préparer seulement 2 ou 3 boites de pétrie.

    1. Samuel

      Bonjour Mathieu,
      Je ferme soigneusement mes géloses avec du parafilm ou du cellophane puis je les met dans un sachet « zip-lock » avant de les mettre au frigo. Elles se conservent très bien de cette façon (au moins 6 mois). Bon courage pour tes essais de culture 😉

  2. Mathieu

    Bonjour,
    J’aimerais savoir la durée de conservation approximative des géloses. Je voudrais m’en servir pour conserver mon mycélium entre chaque culture mais la préparation de seulement 2 ou 3 boites me semble inadapté.
    Merci à l’avance de votre réponse !

  3. Mathieu

    Merci pour ta réponse :) Ton site est passionnant.

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