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déc 01 2011

Comment préparer un milieu gélosé nutritif ?


Réunissez tout les ingrédients nécessaires en consultant la composition des différents milieux de culture et mettez les dans une casserole.

préparer agar agar Portez à ébullition et coupez le feu aussitôt.

preparation agar agarVersez ensuite votre préparation dans un récipient en verre avec un col étroit (désinfecté à l’alcool ou à l’eau de Javel) assez grand mais rentrant dans votre stérilisateur. Recouvrez votre récipient avec du papier d’aluminium pour éviter que votre mélange s’évapore. Placez votre préparation dans votre auto-cuiseur et effectuez une stérilisation pendant seulement 25 à 30 minutes.

verser milieu géloséLaissez un peu refroidir votre récipient avant de verser la préparation dans vos boites de Pétri (environ 0,4cm) en respectant les consignes de stérilité.  Un litre de préparation vous permettra de remplir 35 à 40 boites de Pétri. Laissez les refroidir et lorsque l’agar est durci, les boîtes de Pétri sont prêtes pour l’inoculation mais avant je vous recommande de les placer dans votre incubateur pendant 48h afin d’observer si une contamination se développe. Si vous n’utilisez pas toutes les boîtes de Pétri coulées, vous pouvez les sceller avec du film alimentaire et les conserver dans un réfrigérateur propre pendant 1 ou 2 mois.

La plupart des ingrédients nécessaires (malt, agar, boite de Pétri…) à la réalisation des milieux de culture sont disponibles chez dans la boutique.

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11 Commentaires

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  1. Denise Rousseau

    votre site est un trésor, j’apprécie beaucoup et le fais connaitre. merci de vulgariser ces connaissances pour les mettre à la portée de tous.

    1. Samuel

      Denise: Merci pour les compliments et la publicité. si vous avez des questions n’hésitez pas :)

  2. GrosseTigre

    J’ai utilisé un pot de 500 ml que j’ai remplis avec 400 ml d’agar mais après la strérilisation il ne me reste qu’environ 220 ml dans mon pot donc ça a coulé. J’ai vu un vidéo ou le gars utilise une bouteille de whiskey qu’il remplis presque au complet et ça ne coule pas dans l’autoclave. Comment il fait ?

  3. Samuel

    Bonjour GrosseTigre,
    Il m’est arrivé exactement la même chose il y a une semaine: après stérilisation la moitié de mon mélange c’est évaporé… J’avais oublier de recouvrir mon pot avec une feuille d’aluminium. Je pense que le problème vient de là.
    Bon courage pour ta prochaine préparation!

  4. GrosseTigre

    Je ne pense pas que ce soit ça car j’ai bien mis un papier d’aluminium dessus. Je ne sais pas si c’est la quantité d’eau qui arrive au milieu de la bouteille dans l’autoclave ou la forme de la bouteille qui permet à l’agar de ne pas couler hors du contenant. Regarde a la 40eme seconde de cette
    vidéo

    1. Samuel

      Si cela ne vient pas de l’aluminium, je pense que tu as raison ça doit venir de la forme du récipient. Je ferais mon prochain essaie dans une bouteille avec un col étroit. Merci pour cette vidéo au passage :)

  5. kassy brahim

    je veux une seringue de spores comment dois je faire?

    1. Samuel

      Bonjour,
      Je te recommande de lire cet article qui t’aideras à préparer une seringue de spores.
      Bon courage pour la manipulation :)

    2. meriem

      Salut tu pourrais suivre les instructions données par Samuel

  6. Simon P.

    Bonjour,

    Vous ne parlez pas dans cet article de la stérilisation de la boite de Pétri.
    Je suppose que cela est implicite, mais je souhaiterai avoir votre avis sur la question. Quelle méthode préconisez-vous pour stériliser les boîtes de Pétri ?

    Merci d’avance

    Simon P.

    1. Samuel

      Bonjour Simon,
      J’utilise la plupart du temps des boites de Pétri jetables (en plastiques) et elles sont déjà stérilisées et emballées en sachet. Pour les boites de Pétri en verre, je les emballes (par 10) dans une feuille d’aluminium puis je les stérilise pendant 1 heure à la cocotte minute, mais il y a un petit soucis… Il se créé souvent de la condensation à l’intérieur des boites. Pour les sécher, je les passe au four une petite demi-heure (sans retirer l’aluminium après la stérilisation). Mais il faut absolument que les boites soient bien propres sinon tu auras des traces de brulure à l’intérieur.

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