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nov 18 2011

Comment réaliser une culture liquide ?

Catégories :

Les substrats, Les techniques

by Samuel


Préparation:

Pour faire une culture liquide vous devez commencer par préparer votre récipient et votre mélange d’eau sucrée comme expliqué dans l’article: Qu’est ce qu’une culture liquide de mycélium?

Stérilisation:

Une fois que vos récipients sont prêts vous devez les stériliser:

-Fermez les couvercles de vos pots et posez-les dans le panier de l’autocuiseur.

-Allumez le feu et comptez 20 à 25 minutes après le sifflement de la soupape de l’autocuiseur puis coupez le feu.

-Retirer la soupape pour faire redescendre la pression et laissez refroidir vos pots jusqu’à ce qu’ils soient à température ambiante.

Inoculation:

Cette étape doit être réaliser avec  un maximum de stérilité afin de lutter contre les vecteurs de contaminations. Comme vos pots sont étanches et ont été stérilisés, il se crée un vide à l’intérieur. Vos pots produiront un « claquement » à l’ouverture et de l’air contaminé peut être aspiré. Pour évitez cela vous pouvez injecter de l’air stérile avec une seringue par le bouchon de silicone (voir l’article: Qu’est ce qu’une culture liquide?).

Pour remplir votre seringue d’air stérile, il vous suffit d’aspirer lorsque l’aiguille est rougie par une flamme. Si vous n’avez pas réalisé de bouchon en silicone je vous recommande d’ouvrir le couvercle avec un mouchoir imbibé d’alcool et de refermé aussi tôt que le vide est compensé.

Vous pouvez inoculer votre culture liquide avec:

-chauffez le tour de votre pot à la flamme.

-dévissez le couvercle SANS l’ouvrir.

-chauffez la lame de votre scalpel et laissez la refroidir avant de gratter l’empreinte de spores jusqu’à obtenir un petit dépôt.

-Soulevez rapidement le couvercle et déposez les spores qui se trouvent sur votre lame de scalpel puis refermez le couvercle.

culture de mycéliumUne fois votre culture liquide inoculée il ne vous reste plus qu’à la mettre dans votre incubateur et attendre que le mycélium se développe et forme une sorte de nuage visqueux.

Utilisation:

-Secouez vivement votre récipient de culture liquide afin de « casser » le mycélium en petits morceaux.

-Aspirez la culture avec une seringue dont vous aurez chauffé l’aiguille  (du plus gros diamètre possible pour que le mycélium puisse passer) à la flamme (laisser refroidir avant d’aspirer)

culture mycélium liquide

-Utilisez votre mycélium comme une seringue de spores.

Conservation:

Lorsque le mycélium arrête de se développer, vous pouvez conserver votre culture liquide au frigo (plus d’une année)

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8 comments

  1. Laurent D.

    22 novembre 2011 à 22 h 16 min (UTC 2)

    Répondre

    Vous dites qu’on peut inoculer notre liquide avec un morceau de champignon… Est-ce qu’il suffit dans ce cas d’ouvrir le récipient et de laisser tomber le petit morceau de chapeau dans le liquide?

    Dans ce cas, combien de morceaux de champignons (comme ceux prélevés dans votre exemple) doit-on utiliser par bocal, et par quantité de liquide dans celui-ci?

    Il semblerait également qu’on puisse inoculer le liquide avec une emprunte de spores. Est-il possible de simplement déposer le morceau d’aluminium ou de papier qui contient les spores dans le bocal contenant le liquide? Ou faut-il absolument gratter le morceau de papier / aluminium avec un scalpel?

    Enfin, combien d’empreintes de champignons faut-il placer par bocal et par quantité de liquide?

    Merci d’avance pour les précisions que vous apporterez à mes questions qui sont nombreuses (et je m’en excuse)!

    1. admin

      23 novembre 2011 à 13 h 52 min (UTC 2)

      Laurent:
      Tu dois prélever un morceau de champignon et le placer dans le liquide en respectant les règles de stérilité (travail dans le cône stérile d’un bec bunzen ou d’une lampe à alcool, stérilisation du scalpel, bonne hygiène générale du plan de travail, ect…)
      Un seul morceau suffit, si il est bien prélève et exempt de contamination, pour que le mycélium se développe dans ta culture liquide.
      Je te déconseille de déposer le papier ou la feuille d’aluminium en entier cela augmenterait grandement les risques de contaminations. Une seule empreinte peut servir pour plusieurs cultures liquides, en grattant une petite surface du papier avec un scalpel stérile, tu recueilles déjà un très grand nombre de spores!
      Bonne chance dans tes expériences :)

  2. Laurent D.

    13 décembre 2011 à 14 h 35 min (UTC 2)

    Répondre

    Cela fait un peu plus de 2 semaines que je viens de réaliser mes premières expériences de création de milieu de culture liquide et d’inoculation.

    J’ai choisi d’utiliser la méthode de reproduction par prélèvement d’un morceau du chapeau ou du pied, car je trouvais cela plus simple.

    J’ai opté pour des pleurotes, et utilisé une petite partie de l’intérieur du pied pour inoculer 4 cultures liquides réalisées dans d’ancien tubes à épices désinfectés à l’alcool.

    Aujourd’hui, après plus de 2 semaines, je ne sais pas si ma première expérience est une réussite ou un échec… Je veux dire par là que j’ai l’impression qu’un petit nuage visqueux s’est formé dans chacun des 4 tubes (ce « nuage » n’a pas la même consistance que le morceau de champignon qui trempe avec lui), mais ce nuage ne fait que un demi cm sur un demi cm (et n’a pas forcément la même consistance: 2 bocaux ont un nuage assez compacte, les 2 autres ont plutôt un nuage de filaments qui s’étalent)… D’où mon interrogation, car d’après la photo du blog, il semblerait que le mycélium doive coloniser l’ensemble du bocal. Est-ce simplement une question de temps?

    Voila, je pense que ceci est un bon petit résumé de ma première expérience et des questions qui en découlent. ;-)

    Bonne journée

    1. admin

      13 décembre 2011 à 17 h 11 min (UTC 2)

      Bonjour Laurent,
      Merci pour ton retour sur ton premier essai de culture liquide!
      Je pense qu’il doit y avoir un soucis quelque part, car une culture liquide se développe plus vite en général. Serait-il possible d’avoir une photo ou deux des tes flacons?
      Est-ce que la culture liquide est trouble? Cela pourrait être un signe de contamination bactérienne.
      As-tu bien laisser refroidir ta lame avant d’effectuer le prélèvement de tissu? Le tissu peut mourir suite à une brulure.
      La température d’incubation est-elle bonne?
      Dans de bonnes conditions un beau nuage doit se développer dans le récipient entre 48 et 72heures. Si le nuage est toujours si petit au bout de deux semaines je pense qu’il y a un soucis mais lequel…
      Le sirop utilisé pour la culture contenait un mélange de glucose-fructose?

  3. nico du 24

    14 avril 2012 à 14 h 58 min (UTC 2)

    Répondre

    bonjour,
    dans un autre commentaire je vous avez faire par de mon inquiétude par rapport au silicone et la possibilité qu’il s’y fasse un trou avec l’aiguille après inoculation ou aspiration du mycélium et vous m’avez répondu que le silicone se rétracter après sorti de l’aiguille, un peu plus haut vous marquez :

     » pensez à reboucher le silicone afin que le pot reste hermétiquement fermé après l’injection »

    Donc je me posez la question, est ce qu’il faut malgré qu’il se rétracte quand même un peu rebouchez la marque laissez par l’aiguille?
    j’ai stériliser mes cultures liquides et j’attends quelle refroidissent pour les inoculer :)
    merci de votre réponse, amicalement
    nico du 24.

    1. Samuel

      14 avril 2012 à 15 h 05 min (UTC 2)

      Bonjour Nico,
      Normalement le silicone se rétracte mais si vous voulez être sure remettez en un peu.
      Bon courage pour votre inoculation et pensez à stériliser votre aiguille :)

  4. nico du 24

    17 avril 2012 à 11 h 46 min (UTC 2)

    Répondre

    bonjour,
    sa y est l’inoculation a était faite, tout est dans l’incubateur il y a plus qu’a attendre… :)
    et en parlant de stériliser l’aiguille, vous me conseillez d’attendre combien de temps après avoir chauffer l’aiguille par rapport a la chaleur et aux spores, pour ne pas que sa les tues si trop de chaleur?

    amicalement, nico du 24.

    1. Samuel

      17 avril 2012 à 13 h 56 min (UTC 2)

      Bonjour,
      Après la stérilisation de l’aiguille, il faut patienter entre 20 et 30 secondes avant d’inoculer. Veillez à ne rien toucher et à garder l’aiguille proche de la flamme durant le refroidissement. Bonne chance pour l’incubation :)

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